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更快找到技术问题的答案

作者:Michelle Tetreault Carlson 来源:美国MoBio实验室【字号:
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无论是不知道该选择哪款DNA提取试剂盒还是提取操作上有问题,MO BIO技术支持都可以帮到您。我们多半会遇到一些类似的问题,可以很快给出答案。然而有时也是要耗点脑筋。通常是因为我们没有足够的信息来解决。此时,我们会写邮件或回电话给您,询问更多细节(根据具体情况),我们可能会问更多问题。当我们还在来回交流问题时,其实我们了解您很希望能赶紧回到研究当中。于是我们想也许为您列出一些提示,使得问题解决过程更流畅。这里总结出五个关键要素。这个列表并不全面,但是,如果您能即时给我们提供相关信息,我们会更快地让您的实验回到正轨。

动物的、植物的,还是矿物的?

对于起始样品的成分,了解得越具体越好。如果样品是植物,那是植物哪个部位?是叶片、根还是种子?是什么种类?如果样品是土壤,土壤成分是什么?它的有机物、沙、淤泥或黏土含量是高是低?湿润还是干燥?会不会有什么不寻常的物质可能会影响土壤化学性质?例如,它是从一个铜矿或盐湖地采集的来的。诸如此类的信息对于确定最佳方案是很重要的。

样品采集和保存

使用DNA/RNA提取试剂盒之前,要收集并保存样品。这些操作同样品的组成成分一样重要,尤其是用来提RNA的。让我们知道样品的保存温度,室温、4℃、-20℃,抑或是-80℃。从收集样品到冷冻保存是否有耽误?是否使用了像RNALater、乙醇或福尔马林等保护液也很关键。保护液会影响细胞裂解、DNA纯化和酶促反应。有时也应该略知样品的由来。比如,您作为一个研究生,从实验室搭档那儿接到的样品。如果也不是确定,告诉我们您所知道的任何信息也好。

您要获得什么?

有些客户在处理一些含各种不同细胞的复杂样品。所以在向我们咨询技术问题时,应让我们知道目标细胞类型是什么。比如,粪便样本可能会含人体细胞、植物细胞、真菌细胞和细菌细胞。如果您只对人体细胞的DNA感兴趣,我们会建议撤掉研磨珠击打步骤,改而添加蛋白酶K消化。然而,如果您要检测诸如真菌孢子等难裂解细胞的DNA,我们建议换用更强力的珠磨研磨,和耐受性更好的研磨珠。 此外,让我们知道您想要的是什么类型的核酸。是基因组、质粒、线粒体DNA,还是rRNA、mRNA或小RNA。甚至都要。无论如何,让我们知道越多细节越好!

加样量

MO BIO的每款试剂盒已按特定样品类型和加样量进行了优化。所以,如果您的样品不标准,请给我们提供线索。有时,客户会增加样品量或提取一个与试剂盒功能不符的样品类型。例如,正常的PowerSoil操作说明要求称取250mg土壤,然而,如果将PowerSoil试剂盒用于提取叶片中的微生物DNA,加250mg样品并不合适。这个量的叶片含有的生物量和抑制因子水平与250mg土壤含有的量不同。叶片的细胞数量和抑制因子含量更多,因此起始样品量要减少。 同时请记住,我们的试剂盒常规说明书是为新鲜样品优化的。如果是冻干样品,加样量要减少。冻干植物组织或粪便通常需要使用新鲜组织量的5-10%。像所有生物样品一样,它们大多数都是水分。

均质化

产率低通常是细胞裂解不充分导致。我们大部分试剂盒都采用珠磨研磨,使用细碎的研磨珠在密闭塑料管中最样品进行击打破碎。该过程可使用带有适配器的涡旋仪或强力珠磨研磨设备,比如PowerLyzer 24孔强力珠磨破碎仪。所以让我们知道所使用的仪器、样品的研磨和时间以及研磨珠套管的类型。如果使用的不是我们的涡旋仪适配器,请告诉我们型号。通常解决产率低的方式就是换合适的适配器或珠磨研磨套管等简单的操作。

最后一点

对说明书做的任何改动,哪怕非常小,都有可能影响提取结果。很多时候,我们绞尽脑汁去想为什么这个客户的DNA提取总是失败,说话之间他们提到了使用两倍加样量或用了保护剂,这都与试剂盒不兼容。所以,即便只是一丝疑惑,也欢迎与我们交流。给我们提供的信息越多越好。请记住,你的问题很可能其他人已经有过。所以不要犹豫联系技术支持,哪怕你认为是一个很蠢的问题。我们将会为您节省大量的时间!

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